Care este scopul utilizării ddNTP-urilor?
Care este scopul utilizării ddNTP-urilor?

Video: Care este scopul utilizării ddNTP-urilor?

Video: Care este scopul utilizării ddNTP-urilor?
Video: 7.1 Sanger Sequencing using Dideoxyribonucleic Acid Nucleotides (ddNTPs) 2024, Noiembrie
Anonim

DdNTP se refera la Dideoxinucleotide trifosfați care sunt utilizați în metoda dideoxi Sanger pentru a produce diferite lungimi de catenele de ADN pentru secvențierea ADN-ului. Acest lucru duce la terminarea procesului de polimerizare a ADN-ului (sau alungire a ADN-ului), deoarece acest proces are nevoie de o grupare 3'-OH pentru a continua.

Din acest motiv, de ce sunt utilizate ddNTP-urile în secvențiere?

Dideoxinucleotide sunt inhibitori de alungire a lanțului ai ADN polimerazei, folosit în metoda Sanger pentru ADN secvențierea . Dideoxirribonucleotidele nu au o grupare hidroxil 3', prin urmare nu mai poate avea loc o alungire suplimentară a lanțului odată ce această dideoxinucleotidă se află pe lanț. Acest lucru poate duce la terminarea ADN-ului secvenţă.

În mod similar, ddNTP-urile se atașează la dNTP-uri? Una sau mai multe dintre dNTP-uri sunt etichetate radioactiv pentru a ajuta la vizualizarea produselor de replicare. În cele din urmă, fiecare tub primește una dintre cele patru nucleotide speciale numite dideoxinucleotide ( ddNTP-uri ). Cu toate acestea, odată încorporată, ADN polimeraza nu poate extinde în continuare lanțul, deoarece are nevoie de un 3'-OH atașați la următoarea nucleotidă.

În mod similar, cineva se poate întreba cum opresc ddNTP-urile o reacție de secvențiere?

Când sunt prezente în cantități mici în secvențierea reacțiilor , trifosfați dideoxiribonucleozidici ( ddNTP-uri ) termina reacție de secvențiere în poziții diferite în catenele de ADN în creștere. ddNTP-urile opresc o reacție de secvențiere deoarece ele: determină căderea ADN-polimerazei de pe lanțul șablon. c.

Ce tehnică care implică dideoxinucleotide ar putea fi utilizată?

Secvențierea Sanger este a metodă de secvențiere a ADN-ului bazată pe încorporarea selectivă a caten-terminating dideoxinucleotide prin ADN polimerază în timpul replicării ADN in vitro. Dezvoltat de Frederick Sanger și colegii în 1977, a fost cel mai răspândit folosit secvențierea metodă de aproximativ 40 de ani.

Recomandat: