Ce se întâmplă dacă adăugați prea multă enzimă de restricție?
Ce se întâmplă dacă adăugați prea multă enzimă de restricție?

Video: Ce se întâmplă dacă adăugați prea multă enzimă de restricție?

Video: Ce se întâmplă dacă adăugați prea multă enzimă de restricție?
Video: Mănâncă usturoi în fiecare zi și vezi ce se întâmplă cu tine 2024, Decembrie
Anonim

Poate apărea digestia incompletă când prea mult sau de asemenea mic enzimă este folosit. The prezența contaminanților în cel Probă de ADN poate sa inhiba enzimele , rezultând și o digestie incompletă. niste enzime de restricție necesită cofactori pentru activitatea deplină.

În plus, de ce sunt adăugate ultimele enzime de restricție?

The enzima de restrictie este de obicei ultimul componentă adăugat la o reacție pentru a se asigura că nu este expus la condiții extreme. Reacția asamblată trebuie amestecată după enzimă plus. Se amestecă toate soluțiile care conțin enzime de restricție ușor pentru a evita enzimă inactivare.

În plus, cum poate fi îmbunătățită digestia cu enzime de restricție? Nu utilizați mai mult decât cel recomandat enzimă cantitate (de exemplu, 10 unități de enzimă per microgram de ADN). Reduceți cantitatea de enzimă în reacție, dacă este necesar. Evitați incubarea prelungită a digestie reacţie. Utilizați tamponul de reacție recomandat.

De asemenea, știți, de ce nu ar fi tăiat o enzimă de restricție?

Pregătirea ADN-ului pentru a fi scindat ar trebui să să fie lipsit de contaminanți cum ar fi fenolul, cloroformul, alcoolul, EDTA, detergenții sau sărurile excesive, toate acestea putând interfera cu enzima de restrictie activitate. Dacă un inhibitor (adesea sare, EDTA sau fenol) este prezent, ADN-ul de control va fi prezent nu tăiate după amestecare.

De ce cantitatea de enzimă poate provoca activitatea stelelor?

Activitatea vedetei este relaxarea sau alterarea specificului restricţiei enzimă clivaj mediat al ADN-ului care poate sa apar în condiții de reacție care diferă semnificativ de cele optime pentru enzimă . Activitatea vedetă poate se întâmplă din cauza prezenței Mg2+, la fel de este văzut în HindIII, de exemplu.

Recomandat: