Cuprins:

Cum se introduce o genă într-o plasmidă?
Cum se introduce o genă într-o plasmidă?

Video: Cum se introduce o genă într-o plasmidă?

Video: Cum se introduce o genă într-o plasmidă?
Video: Insertion of Recombinant DNA 2024, Noiembrie
Anonim

Pașii de bază sunt:

  1. Tăiați deschide plasmidă și „paste” în gena . Acest proces se bazează pe enzimele de restricție (care taie ADN-ul) și ADN ligaza (care se unește cu ADN-ul).
  2. Introduce cel plasmidă în bacterii.
  3. Creste o multime de plasmidă -purtător de bacterii și folosiți-le ca „fabrici” pentru a face proteina.

De asemenea, cum poate fi inserată o genă într-o plasmidă GCSE?

este introdus într-o plasmidă folosind enzime ligază. cel plasmidă merge în o celulă bacteriană. bacteria transgenică se reproduce, rezultând în milioane de bacterii identice care produc insulină umană.

În plus, cum subclonați o genă? Pași de bază pentru Subclonarea Eliberați și purificați insertul din vectorul părinte, legați acest insert într-un vector de destinație pregătit, transformați această reacție de ligatură în celule bacteriene competente. Apoi ecranați celulele transformate pentru inserție.

Ținând cont de acest lucru, care sunt cei 4 pași ai clonării genelor?

În protocoalele clasice de digestie cu enzime de restricție și de donare prin ligatură, clonarea oricărui fragment de ADN implică în esență patru pași:

  • izolarea ADN-ului de interes (sau ADN-ului țintă),
  • ligatura,
  • transfecție (sau transformare) și.
  • o procedură de screening/selecție.

Cum amplificați o plasmidă?

Procedura experimentala

  1. Rulați PCR și purificați produsul PCR: rulați PCR pentru a amplifica ADN-ul dvs. de inserție.
  2. Digerează-ți ADN-ul:
  3. Izolați inserția și vectorul prin purificare cu gel:
  4. Ligați inserția în vectorul dvs.:
  5. Transformare:
  6. Izolați plasmida finită:
  7. Verificați-vă plasmida prin secvențiere:

Recomandat: