Cuprins:

Cum alegi clonele?
Cum alegi clonele?

Video: Cum alegi clonele?

Video: Cum alegi clonele?
Video: Find out YOUR Clone Trooper TYPE - Star Wars Quiz 2024, Noiembrie
Anonim

Cand alegând A clonare , asigurați-vă că rădăcinile sunt puternice, albe și ies cu nerăbdare din mediul de creștere. Dacă rădăcinile sunt maronii și zbârcite sau par inactive, puneți-o înapoi și căutați una mai bună.

În plus, cum se clonează o singură celulă?

  1. Numărați celulele pentru a pune ~ 16.000 de celule în primul godeu (A1) al unei plăci cu 96 de godeuri care conține 200 uL de mediu.
  2. Scoateți 100 µL din celulele care conțin A1 și amestecați cu B1, pipetând în sus și în jos de 3x pentru a amesteca bine înainte de a îndepărta 100 µL și amestecați cu C1 etc.

De asemenea, cum alegi o colonie de celule de mamifere? Puneți placa sub microscop pentru a selecta sănătoși nediferențiați colonii . Alege colonii folosind o pipetă P-20 setată la 10ul. Cu grija alege A colonie fără a rupe colonie în single celule și transferați-l într-o placă cu 96 de godeuri cu tripsină. Pipetați în sus și în jos de câteva ori pentru a dispersa colonie.

În mod corespunzător, cum folosiți un cilindru clon?

Folosind forceps mediu steril, ridicați a cilindru de clonare . Apăsați ușor partea de jos plată a cilindru în grăsimea netedă de silicon și îndepărtați printr-o mișcare verticală bruscă. Dacă este făcut corect, acest lucru va oferi o distribuție uniformă a grăsimii pe partea inferioară a cilindru . Seteaza cilindru peste o colonie.

Cum alegi coloniile pentru linii celulare stabile?

Protocolul pentru generarea de linii celulare stabile necesită mai mulți pași, după cum se arată mai jos:

  1. Generați o curbă de ucidere pentru a determina concentrația optimă de antibiotic de selecție.
  2. Transfectarea celulelor cu constructul plasmidic dorit(e)
  3. Selectați și extindeți coloniile policlonale stabile.
  4. Identificați clonele individuale prin diluare limitată și expansiune.

Recomandat: