De ce este necesar să se purifice produsele PCR înainte de secvențiere?

2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Modificat ultima dată: 2023-12-16 00:22

Verificarea doritului produs este esenţial , care include confirmarea unei lipse de nespecifice produse și dimeri de grund. Curat -up de amestecul de reacţie este de asemenea necesar pentru a elimina primerii neîncorporați și dNTP-urile care pot interfera cu reacțiile ulterioare și pot duce la o secvență imposibil de citit.

În plus, de ce este necesară purificarea produselor PCR?

Trebuie să purifica produsele PCR pentru a scăpa de primeri, nucleotide și enzime neutilizate pentru a optimiza succesul ligării, care va menține și secvenționa produs de PCR . La purifica cel produse PCR , se utilizează cromatografia de excludere a mărimii.

Se mai poate întreba, ar trebui să purificați produsele PCR înainte de digestia cu endonuclează de restricție? Majoritatea restricţie enzimele sunt active în PCR tampoane. Pentru aplicațiile de clonare, purificare de Produse PCR înainte de digestie este necesar pentru a elimina ADN polimeraza termofilă activă prezentă în PCR amestec. ADN-polimerazele pot modifica capetele ADN-ului scindat și pot reduce randamentul ligării.

Oamenii întreabă, de asemenea, cum pregătiți produsele PCR pentru secvențiere?

Secvențierea directă a produselor PCR

1. Asigurați-vă că ați amplificat fragmentul potrivit.
2. Trebuie să eliminați toți primerii PCR reziduali și nucleotidele neîncorporate.
3. Dacă primerii PCR vor fi și primerii de secvențiere, asigurați-vă că se potrivesc cu condițiile noastre.
4. Nu supra-concentrați proba!

Puteți secvența produsul PCR?

Direct Secvențierea de Produse PCR . Secvențierea numai foloseste unu grund în locul celor două folosite în PCR . Dacă faci nu îndepărtați ambii grunduri, tu vei ia doi secvente suprapuse unele peste altele care nu sunt citite. Este în regulă să utilizați a PCR grund pentru secvențiere atâta timp cât se potrivește cu condițiile noastre.